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    发布时间:2022-09-27浏览:623次

      凝胶过滤或尺寸排阻是一种简单、的层析方法,用于蛋白或生物大分子的纯化。
      凝胶过滤填料是由葡聚糖苷和3-氯-1,2环氧丙烷以醚键相互铰链而成,不同型号的葡聚糖凝胶用英文字母G表示,如G-25,G-75等,G后面的数字为凝胶吸水量再乘以10。sephacryl:为葡聚糖偶联丙烯基,再和甲叉双丙烯酰胺聚合而成的介质。它有较高的硬度,能承受比普通凝胶更大的静水压力,由于属于部分大网孔型凝胶,可用于分离蛋白质、核酸、多糖和蛋白聚糖甚是病毒颗粒。
      凝胶过滤填料特点:
      1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子,可以非常经济地大规模制备各种天然产物
      2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身,分离结构非常相近的分子
      3、载量可高达300mg样品/ml凝胶,极少需要再生,分离效果可保持十几年不变。
      作为凝胶柱层析中的关键一环,选择合适的填料是关重要的,下面我们来了解下。
      1.当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时,可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中,可简易地测出PI,并选择纯化用缓冲液的佳PH。
      2.若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解,可尝试几种不同的纯化方法:
      (1)使用通用的凝胶过滤方法,选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将 样品分成不同组份。
      (2)用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质,再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
      (3)体积大的样品,往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品,可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理,洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。

     

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